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蚯蚓凍干機(jī)的纖溶酶凍干粉的方法

更新時(shí)間:2022-04-26      點(diǎn)擊次數(shù):813

       

    蚯蚓凍干機(jī)在藥材凍干機(jī)制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法!真空冷凍干燥技術(shù)簡(jiǎn)稱凍干技術(shù),是一項(xiàng)對(duì)食品護(hù)色、保鮮、保質(zhì)的高新加工技術(shù)。目前廣泛用于果蔬、肉禽、水產(chǎn)、調(diào)味品、方便食品及名優(yōu)特產(chǎn)等干燥,可達(dá)到保持食品原有的色、香、味、形、新鮮度不變的目的,且復(fù)水性特好,成品便于貯存和運(yùn)輸,費(fèi)用降低,保存期延長(zhǎng)。在干燥蜂皇漿、人參、龜、鱉、蚯蚓等營(yíng)養(yǎng)保健品,采用真空冷凍干燥工藝,更使人們相信該營(yíng)養(yǎng)品純真自然。

 

真空凍干機(jī)制備蚯蚓纖溶酶凍干粉的方法,其特征在于,包括如下步驟:

    步驟一、蚯蚓粗粉的制備:將活蚯蚓,饑餓一天,自然吐凈泥沙,洗滌,而后在溫度介于2035℃的通風(fēng)條件干燥并制成粉碎,通過(guò)100200目篩制成蚯蚓粗粉;


    步驟二、粗酶溶液的制備:取蚯蚓粗粉用2倍體積的0.1mol/L,pH為7.8的磷酸緩沖液PBS勻漿,加0.1mol/LNaCl溶液,置于4℃冰箱內(nèi)過(guò)夜,然后以10000r/min,4℃離心15min,棄沉淀,取上清;上清液于50℃水浴保溫40min,流水冷卻,再8000r/min,4℃離心10min,取上清,在上清液中加硫酸銨達(dá)30%飽和度,靜置3小時(shí),再8000r/min,4℃離心10min;收集上清液再加硫酸銨達(dá)70%飽和度,靜置3小時(shí),再8000r/min,4℃離心10min,收集沉淀;將沉淀溶于上述緩沖液中,對(duì)上述緩沖液以載留5KD分子量的透析袋透析過(guò)夜去鹽,再將透析液8000r/min,4℃離心10min,取上清液即為蚯蚓纖溶酶粗酶溶液;

       步驟三、粗酶的純化:將蚯蚓纖溶酶粗酶溶液過(guò)Sephadex G75凝膠層析,上柱前預(yù)先用0.02mol/L,pH為7.8的磷酸緩沖液平衡,上柱后用上述緩沖液洗脫至在280nm波長(zhǎng)無(wú)光吸收,洗脫液出現(xiàn)2個(gè)蛋白峰,其中酶活性峰與第1個(gè)蛋白峰重疊,收集重疊部分的酶液,過(guò)DEAECellulose A52離子交換柱,過(guò)柱前先用0.05mol/L,pH為7.8的PBS平衡;然后用含00.5mol/L NaCl的PBS離子強(qiáng)度線性梯度洗脫,洗脫液出現(xiàn)3個(gè)蛋白峰,酶活性峰與蛋白峰第3峰重疊,其余2個(gè)蛋白峰基本無(wú)酶活性,收集活性部分即為蚯蚓纖溶酶純酶;

     步驟四、蚯蚓纖溶酶的修飾:加入蚯蚓纖溶酶純酶和活化的PEG到15mL,pH9.2,0.1mol/L的硼酸緩沖液中,純酶與PEG的重量比是1:50,在30℃下,保溫反應(yīng)1小時(shí),反應(yīng)物對(duì)0.1mol/L,pH7.3的磷酸緩沖液透析過(guò)夜,透析液再以10000r/min,4℃離心l0min, 取上清液過(guò)柱Sephadex G75,收集活性成分,即為蚯蚓纖溶酶修飾酶;

 

步驟五、蚯蚓纖溶酶凍干粉的制備:將蚯蚓纖溶酶修飾酶裝在樣品盤里,料厚不超過(guò)8mm,放進(jìn)真空冷凍干燥機(jī)設(shè)備干燥室內(nèi)進(jìn)行凍干,于-35℃冷凍12小時(shí),然后在5pa的真空度下,升溫至30℃,干燥12小時(shí);繼續(xù)升溫至40℃,真空干燥14小時(shí),得到蚯蚓纖溶酶修飾酶的凍干粉,其含水量為7.0%,蛋白含量為68%,酶活力為1700U/mg。



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